1 适用范围

  本方法规定了水产品中组胺含量的测定方法。

  本方法适用于水产品(鱼类及其制品、虾类及其制品)中组胺的测定。

2 实验原理

  以三氯乙酸为提取溶液，振摇提取，经正戊醇萃取净化，组胺与偶氮试剂发生显色反应后，分光光度计检测，外标法定量。

3 试剂和材料

   除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB / T6682 规定的一级水。

3.1试剂盒组成：

 试剂A、试剂B、试剂C、试剂D、试剂E、试剂F、 试剂G、 试剂H、试剂I。

3.2试剂配制：

3.2.1 试剂A1：称取 0. 2767g (精确至0. 001g )试剂A于50mL 烧杯中，用适量水完全溶解后转移至 100mL 容量瓶中，定容至刻度。此溶液每毫升相当于1.0mg 组胺。置 -20℃ 冰箱储存。保存期为 6 个月。

3.2.2 试剂A2：吸取 1. 0mL 试剂A1于 50mL 容量瓶中，用水定容至刻度。此溶液每毫升相当于 20.0 μ g 组胺，临用现配。

3.2.3 试剂C1：称取 50g试剂C于 250mL 烧杯中，用适量水完全溶解后转移至 500mL容量瓶中，定容至刻度，保存期为 6 个月。

3.2.4  试剂E1：称取 25g 试剂E于 100mL 烧杯中，用适量水完全溶解后转移至100mL 容量瓶中，定容至刻度，保存期为 3 个月

3.2.5 试剂F1： 吸取试剂F 5mL 于 100mL 烧杯中，加水 55mL，,混匀。保存期为 6 个月。

3.2.6 试剂G1：称取0.5g试剂G，加 5mL试剂F1溶解后，再加水稀释至 200mL置冰箱中，临用现配。

3.2.7 试剂H1：称取 0.5g试剂H，加入 100mL水溶解混匀，临用现配。

3.2.8 试剂I：:吸取 5mL 试剂G1，40mL试剂H1，混匀，临用现配。

4 仪器设备

   可见分光光度计。

   分析天平：感量为 0. 001g 。

   具塞比色管: 10mL 。

   分液漏斗 。

   组织捣碎机。

5 分析步骤

5.1 试样制备

   取鲜活水产品的可食部分约 500g 代表性样品,用组织捣碎机充分捣碎，均分成两份分别装入洁净容器中，密封，并标明标记。 -20℃ 保存。

5.2 试样的分析

5.2.1试样提取

   试样提取准确称取已经绞碎均匀的试样 10g (精确至 0.01g )，置于 100mL 具塞锥形瓶中，加入 20mL10%试剂C浸泡2h~3h ,振荡 2min 混匀，滤纸过滤，准确吸取2.0mL滤液于分液漏斗中，逐滴加入试剂E1调节pH在 10~12 之间，加入 3mL 试剂B振摇提取5min ,静置分层，将试剂B提取液(上层)转移至10mL刻度试管中。试剂B提取三次，合并提取液，并用试剂B稀释至刻度。吸取 2.0mL试剂B提取液于分液漏斗中，加入 3mL试剂F1振摇提取,静置分层，将试剂F1提取液(下层)转移至 10mL刻度试管中。提取三次,合并提取液，并用试剂F1稀释至刻度。

5.2.1 测定

分别吸取 0、0. 20 、0. 40 、0. 60 、0. 80 、1. 0mL 试剂A2(相当于0、4. 0、8. 0、12.0、16.0、20.0 μ g组胺)及 2.0mL 试样提取液于 10mL 比色管中，加水至1mL ，再加入 1mL 试剂F1，混匀。加入 3mL 试剂D，3mL 试剂H。加水至刻度,混匀,放置 10min 。将“ 0 ”管溶液转移至 1cm 比色皿,分光光度计波长调至 480nm ，调节吸光度为“ 0 ”后，依次测试系列标准溶液及试样溶液吸光度以吸光度A 为纵轴，组胺的质量为横轴绘制标准曲线。

5.3 结果计算

   试样中组胺的含量按式(1)计算：

 式中：

 X———试样中组胺的含量，单位为毫克每百克(mg/ 100g )；

 m₁———试样中组胺的吸光度值对应的组胺质量，单位为微克(μ g )；

 V ₁———加入试剂C的体积，单位为毫升( mL )；

 10———第一个是试剂B的提取液体积，单位为毫升( mL )；第二个是试剂F提取液的体积,单位为毫升( mL )；

 m₂———取样量，单位为克(g )；

 2———第一个是试剂C提取液的体积，单位为毫升( mL )；第二个是试剂B提取液的体积，单位为毫升( mL )；第三个是试剂F提取液的体积，单位为毫升(mL )；

 100———换算系数；

 1000 ———换算系数。

计算结果保留小数点后一位。

6 精密度

   在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 10% 。

7 其他

 方法定量限：组胺 50mg /kg。

8 注意事项

8.1 试剂盒生产日期见侧面，保质期为6个月。

8.2 通过验证，标准曲线相关系数可达≥0.999。

8.3 样品制备过程中应仔细，否则会造成结果偏差大。

8.4 试剂盒中试剂包括标准曲线可做100次。

8.5 本试剂盒检测方法依据《GB 5009.208-2016 食品安全国家标准 食品中生物胺的测定》第二法。