分光光度法

1  范围

本方法规定了测定生活饮用水、地表水、地下水及工业废水中亚硝酸盐氮。

2  原理

在磷酸介质中，pH值为1.8时，试份中的亚硝酸根离子与4-氨基苯磺酰胺(4- aminobenzenesulfonamide)反应生成重氮盐，它再与N- (1-萘基)一乙二胺二盐酸盐[N -( 1 - naphthyl一l，2一diaminoethane dihydrochio - ride ]偶联生成红色染料，在540nm波长处测定吸光度。如果使用光程长为10mm的比色，亚硝酸盐氮的浓度在0.2mg/L以内其呈色符合比尔定律。

3  试剂和材料

注：在测定过程中，除非另有说明，均使用符合国家标准的分析纯试剂。

3.1试剂盒组成

试剂A 、试剂B、试剂C、试剂D

3.2 试剂配制

试剂B1:吸取试剂A 10.00mL于50mL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，放2～5℃保存，稳定一星期。

试剂B2:吸取试剂A1 1.00mL于50mL容量瓶，用水稀释至刻度，摇匀，当天使用。

4  仪器和设备

分光光度计：具510nm波长，20mm的比色皿；

一般实验室常用仪器。

5  检测步骤

5.1试份

试样最大体积为50.0mL，可测定亚硝酸盐氮浓度高至0.20mol/L。浓度更高时，可相应用较少量的样品或将样品进行稀释后，再取样。

5.2测定

用无分度吸管将选定体积的试份移至50m1比色管(或容量瓶)中，用水稀释至标线，加入试剂A 1.0ml，密塞，摇匀，静置，此时pH值应为1.8土0.3。加入试剂B 20min后、2 h以内，在540nm的最大吸光度波长处，用光程长10mm的比色皿，以实验用水做参比，测量溶液吸光度。

注:最初使用本方法时，应校正最大吸光度的波长，以后的测定均应用此波长。

5.3空白试验

用50mL 水代替试份，按5.2所述步骤进行空白试验。

5.4 色度校正

实验室样品含有悬浮物或带有颜色时，可向每100mL试样中加入2mL试剂C，搅拌，静置，过滤，弃去25mL初滤液后，从试样中取相同体积的第二份试份，测定吸光度，只是不加显色剂，改加试剂D 1.0mL。

5.5校准

在一组六个50ml比色管(或容量瓶)内，分别加试剂B2为0、1.00、3.00、5.00、7.00 和10.00ml（含量为0.0μg、1.0μg、3.0μg、5.0μg、7.0μg、10.0μg），用水稀释至标线，然后按5.2开始，操作步骤同试份。从测得的各溶液吸光度，减去空白试验吸光度，得校正吸光度Ar，绘制以氮含量(ug)对校正吸光度的校准曲线，亦可按线性回归方程的方法，计算校准曲线方程。

6  结果表示

6.1计算方法

试份溶液吸光度的校正值A，按下式计算：、

Ar =As—Ab—Ac ………………(1)

式中： As      试份溶液测得吸光度；

Ab       空白试验测得吸光度；

Ac       色度校正测得吸光度。

由校正吸光度Ar值，从校准曲线上查得(或由校准曲线方程计算)相应的亚硝酸盐氮的含量m_N (ug) 。

试份的亚硝酸盐氮浓度按下式计算：

式中：C_N       亚硝酸盐氮浓度，mg/L；

m_N       相应于校正吸光度Ar的亚硝酸盐氮含量，μg；

V        取试份体积，ml。

试份体积为50m1时，结果以三位小数表示。

6.2  精密度和准确度

6.2.1  取平行双样测定结果的算术平均值为测定结果。

6.2.2  23个实验室测定亚硝酸盐氮浓度为7.46×10^-2mg/L的试样，重复性为1.1× 10^-3mg/L，再现性为3.7 ×10^-3mg/L，加标百分回收率范围为96%～104%。15个实验室测定亚硝酸盐氮浓度为6.19×10^-2mg/L的试样，重复性为2.0×10^-3mg/L. 再现性为3.7×10^-3mg/L，加标百分回收率范围为93%～103%。

7  注意事项

7.1 试剂盒保存在避光、2～8℃冰箱中。

7.2 本试剂盒检测方法依据《GB/T 7493-1987 水质 亚硝酸盐氮的测定分光光度法》。